此頁面上的某些內容不提供英文版本，將默認以當前可用的語言顯示。

Инструкция к набору Ribo488 RNA BR Fluorimetric Assay для определения количества РНК

Набор предназначен для измерения концентрации РНК в широком диапазоне на флуориметре (подходит любая версия флуориметра, например, QuReader 1 или QuReader 8).

Набор позволяет точно измерять концентрацию РНК в диапазоне от 100 пг/мкл до 1000 нг/мкл для исходного образца (диапазон количества РНК для измерения на флуориметре: 2–1000 нг РНК в 200 мкл образца для измерения).

Основной компонент набора — флуоресцентный краситель Ribo488, селективно связывающий РНК и проявляющий выраженную флуоресценцию в составе комплекса с молекулой РНК. Благодаря селективности, результаты измерения, полученные с использованием Ribo488, не зависят от примесей ДНК, одноцепочечной ДНК, нуклеотидов и белков. Другие примеси в незначительном количестве, такие как соли, детергенты и растворители, оказывают лишь несущественное влияние на результаты измерений.

Использование набора Ribo488 RNA BR Fluorimetric Assay является удобным способом измерения РНК в широком диапазоне концентраций:

  • он требует небольшого объема исходного образца (1–20 мкл);
  • все измерения проводятся при комнатной температуре;
  • в зависимости от количества образцов измерения занимают в среднем 15–20 минут;
  • флуоресценция образцов стабильна в течение 3 часов.

Набор включает в себя 200× концентрат флуоресцентного красителя Ribo488, буфер для приготовления рабочего раствора красителя и стандарты концентрации РНК (0 и 100 нг/мкл). Для удобства мы предлагаем фасовки набора, включающие совместимые с флуориметром тонкостенные пробирки.

Для определения в образце РНК примеси белка можно использовать набор QuDye® Protein для определения количества белка.

套件組成

套件組成部分 數量
S2502
40 assays 		12502
100 assays 		14502
100 assays 		52502
500 assays 		54502
500 assays
11510, Ribo488 RNA Quantification Reagent, 100 uL 1 — — — —
N2150, TE buffer, 20x, 25 mL — — — 1 —
G2150, TE buffer, 20x, 5 mL 1 1 — — —
A0650, RNA quantification standard, 100 ng/uL in TE buffer, 100 uL 1 1 1 — —
B9650, Quantitative standard, 0 ng/uL in TE buffer, 1 mL 1 1 1 — —
21510, Ribo488 RNA Quantification Reagent, 250 uL — 1 1 — —
S3250, TE buffer, 1x, 50 mL — — 1 — 5
51510, Ribo488 RNA Quantification Reagent, 1.25 mL — — — 1 1
B0650, RNA quantification standard, 100 ng/uL in TE buffer, 1 mL — — — 1 1
G9650, Quantitative standard, 0 ng/uL in TE buffer, 5 mL — — — 1 1

保存期限 12 個月。

Прежде чем начать

  • Все измерения с использованием набора Ribo488 RNA BR Fluorimetric Assay green должны проводиться при комнатной температуре (22–28°С).
  • Перед началом работы тщательно прогрейте все используемые растворы до комнатной температуры.
  • При регулярном использовании набора рекомендуется хранить краситель Ribo488 RNA Quantification Reagent и 1× буфер TE Buffer при комнатной температуре в защищенном от света месте, стандарты при температуре 4°С.
  • Обращаем Ваше особое внимание на то, что колебания температуры образца оказывают значительное влияние на результаты измерений. Избегайте нагрева образцов, в частности, не держите в руках пробирки с образцами непосредственно перед измерениями на флуориметре.
  • Поскольку даже кратковременное нахождение пробирки с образцом в гнезде флуориметра способствует нагреву образца, проводите измерения флуоресценции сразу после того, как поместите пробирку с образцом в гнездо флуориметра.
  • При необходимости повторного измерения одного и того же образца, следует извлекать пробирку с образцом из флуориметра сразу после измерения и помещать образец в гнездо флуориметра только на период измерения интенсивности флуоресценции.
  • Измерение интенсивности флуоресценции следует выполнять согласно инструкции к флуориметру. В зависимости от версии флуориметра пункты меню могут отличаться от приведённых ниже.
  • Данным набором можно пользоваться в режиме флуориметра в зеленом канале на приборах серии QuReader и других моделях с длиной волны возбуждения 430—495 нм и длиной волны эмиссии в зеленом канале 510—580 нм.
  • Также измерение концентраций РНК можно выполнять в режиме dsDNA Broad Range на флуориметрах серии QuReader и аналогичных приборах.

Измерение концентрации РНК в режиме флуориметра

  1. Подготовьте 8 пробирок на 1,5 мл, подпишите их. Приготовьте панель разведений 100 нг/мкл РНК методом титрования по схеме:
    1. 100 нг/мкл (200 мкл стандарта)
    2. 50 нг/мкл (100 мкл 1× TE-buffer и 100 мкл стандарта 100 нг/мкл)
    3. 25 нг/мкл (100 мкл 1× TE-buffer и 100 мкл стандарта 50 нг/мкл)
    4. 12,5 нг/мкл (100 мкл 1× TE-buffer и 100 мкл стандарта 25 нг/мкл)
    5. 6,25 нг/мкл (100 мкл 1× TE-buffer и 100 мкл стандарта 12,5 нг/мкл)
    6. 3,12 нг/мкл (100 мкл 1× TE-buffer и 100 мкл стандарта 6,25 нг/мкл)
    7. 1,56 нг/мкл (100 мкл 1× TE-buffer и 100 мкл стандарта 3,12 нг/мкл)
    8. 0 нг/мкл (100 мкл 1× TE-buffer)
  2. Приготовьте рабочий раствор красителя. Для этого в пробирке на 2 мл смешайте 10 мкл красителя и 1990 мкл 1× TE buffer.
  3. Подготовьте 8 пробирок на 0,5 мл, добавьте в них стандарты по 10 мкл и по 190 мкл рабочего раствора красителя. Пробирки вортексируйте, сбросьте капли и инкубируйте в течение 5 минут при комнатной температуре.
  4. Проведите измерения флуоресценции.

Расчёт концентрации РНК

  1. Постройте калибровочную кривую, используя данные об уровне флуоресценции стандартных растворов в координатах: по оси абсцисс (x) — конечная концентрация РНК в стандартном растворе; по оси ординат (y) — значение флуоресценции.
  2. Аппроксимируйте данные линейной функцией, найдите параметры функции A и B. Для этого можно воспользоваться калькулятором для расчета концентрации РНК.
  3. Линейное уравнение зависимости флуоресценции (FL) от концентрации (C) выглядит следующим образом:
    FL = A × C + B;
    где FL — интенсивность флуоресценции в условных единицах, C — концентрация РНК, A и B — параметры линейной функции.
  4. Вычислите концентрации РНК в экспериментальном образце:
    Cобразца = (FLобразца − B)/A;
    где FLобразца — флуоресценция образца, A и B — параметры найденной линейной функции.
  5. Вычислите концентрации РНК в исходном образце:
    Сисх = Vобразца × Cобразца / Vисх;
    где Vобразца — объём образца и Vисх — объём исходного раствора РНК, использованный для приготовления экспериментального образца.

Ниже представлены графики зависимости RFU от теоретической концентрации РНК в образцах разведения и зависимости рассчитанной концентрации (Assay concentration) от теоретической концентрации РНК в образцах на приборе QuReader в режиме измерения флуоресценции:

Assay concentration, ng/uL

RFU

Внимание! Набор Ribo488 RNA BR Fluorimetric Assay адаптирован для измерения концентраций РНК на флуориметрах в режиме dsDNA Broad Range в зеленом канале. Измерения можно проводить по протоколу, описанному в инструкции для набора QuDye® dsDNA BR для определения количества двухцепочечной ДНК. В этом случае достаточно калибровки по двум точкам и расчёт концентрации РНК с помощью софта флуориметра.

Условия хранения

  • Хранить при температуре 4°С. Прогреть до комнатной температуры перед использованием.
  • Транспортировка: до одной недели при комнатной температуре.
  • Срок хранения в месяцах: 12
已添加您的物品. 查看您的 購物車 或 繼續結賬
物品數量不正確.