Реакционная смесь для кПЦР ProbeMaster ROX, 5x
Смесь для кПЦР ProbeMaster ROX подходит для точного определения содержания ДНК матрицы в пробе и может применяться для определения уровня копийности и экспрессии генов, генотипирования и детекции SNP, и др. Готовая 5-кратная реакционная смесь содержит все необходимые компоненты для проведения количественной ПЦР, ее состав оптимизирован для получения идеальных результатов с минимальным значением порогового цикла и высоким уровнем отношения сигнал/фон. Смесь ProbeMaster позволяет решить большое количество задач с минимальными затратами времени. Полимераза с технологией "горячего старта" предотвращает неспецифическую амплификацию. Для детекции флуоресценции следует использовать ДНК-зонд, меченный флуорофором и тушителем (гидролизуемые зонды, "молекулярные маяки", праймеры типа "скорпион") или два зонда, меченных флуорофорами, образующими FRET-пару (вы можете заказать синтез зондов в Lumiprobe). Помимо ДНК-зондов, для детекции флуоресценции может использоваться интеркалирующий краситель dsGreen (dsGreen). Нормировка сигнала осуществляется с помощью входящего в состав смеси референсного красителя ROX* - реагента производства Lumiprobe. Концентрация ROX была специально оптимизирована для работы на большинстве real-time амплификаторов, доступных на рынке. Обратите внимание, что в состав данной смеси не входит UDG и dUTP.* Для постановки реакции просто смешайте в пробирке смесь для кПЦР ProbeMaster, праймеры, зонд/интеркалирующий краситель, ДНК и воду. Объём 5-кратной смеси 1 мл рассчитан на проведение 200 реакций объёмом 25 мкл.
Формат ПЦР: количественная ПЦР (ПЦР-РВ) с применением интеркалирующих красителей или гидролизуемых зондов
Состав реакционной смеси: HS Taq ДНК-полимераза, смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов, ПЦР-буфер (содержит Mg2+), референсный краситель ROX
Совместимость с оборудованием: совместим с большинством real-time амплификаторов, в том числе производства Applied Biosystems (7300, 7500, 7500 Fast, 7900HT, QuantStudio 12k Flex,QuantStudio 3, QuantStudio 5, QuantStudio 6 Flex, QuantStudio 7, StepOne, StepOnePlus, ViiA 7 System), Bio-Rad (CFX384, CFX 96, iQ5), Roche (LC 480), Stratagene (MX3000P, MX3005P, MX4000) и др.
Ключевые характеристики смеси:
- Для постановки реакции в смесь необходимо добавить интеркалирующий краситель или зонд для детекции продукта амплификации, образец ДНК, праймеры и воду.
- Референсный краситель ROX позволяет нормировать интенсивность флуоресценции зондов и интеркалирующих красителей типа dsGreen.
- Подходит для ПЦР фрагментов длиной до 3 тыс. п.о., не более 70% GC, не требующих высокоточной амплификации.
- В качестве матрицы может использоваться геномная, вирусная, плазмидная ДНК и др.
- Формат готовой реакционной смеси снижает риск контаминации образцов.
- В состав реакционной смеси входит Taq-полимераза с технологией "горячего старта" (Hot Start). Используемая HS Taq ДНК-полимераза представляет собой комплекс моноклональных антител с ферментом. Прогрев образца в первом цикле ПЦР приводит к инактивации антител в составе комплекса и активирует фермент. Технология "горячего старта" позволяет предотвратить неспецифическую амплификацию и образование димеров праймеров.
- HS Taq ДНК-полимераза обладает 5'-3' полимеразной, 5'-3' экзонуклеазной, аденилтрансферазной активностью.
- Подходит для приложений, в которых не могут использоваться урацил-содержащие продукты амплификации*
Таблица подбора мастер микса для ПЦР
Реакционные смеси для количественной ПЦР (ПЦР-РВ) | ||||
---|---|---|---|---|
Название смеси | dsGreen | ROX | UDG, dUTP | Применение |
PCR/qPCR master mix UDG Cat.# •7514 | — | — | ✔ | кПЦР с ДНК-зондами или интеркалирующим красителем |
ProbeMaster ROX qPCR mix Cat.# •7114 | — | ✔ | — | |
Реакционная смесь для стандартной ПЦР | ||||
Basic PCR master mix Cat.# •5024 | — | — | — | ПЦР с последующим анализом методом гель-электрофореза, содержит краситель для нанесения на гель |
Универсальная реакционная смесь | ||||
PCR/qPCR master mix Cat.# •5534, •7534 | — | — | — | кПЦР с ДНК-зондами/интеркалирующим красителем или стандартная ПЦР с последующим анализом методом гель-электрофореза |