抗體標記試劑盒 (Antibody Labeling Kits)

該試劑盒用於製備標記抗體，每個抗體具有2.5-3個標記。該試劑盒包含十個標記反應的所有試劑和材料，每個反應可標記100 ug 抗體。該染料是一種 NHS 酯，要控制使用量。它在弱鹼性 pH 條件下與抗體上的賴氨酸氨基基團發生反應。抗體的純化是通過使用矽膠離心柱來實現的。這些試劑盒包含磺化水溶性染料，最適合標記包括抗體在內的敏感蛋白。

套件組成

套件組成部分 數量
1321-10rxn
10 反應 		3321-10rxn
10 反應 		7321-10rxn
10 反應 		5321-10rxn
10 反應 		6321-10rxn
10 反應 		1821-10rxn
10 反應 		6821-10rxn
10 反應
N1320, sulfo-Cyanine3 NHS酯 (sulfo-Cyanine3 NHS ester), 1 rxn 10 — — — — — —
N3320, 磺基-Cyanine5 NHS 酯 (sulfo-Cyanine5 NHS ester), 1 rxn — 10 — — — — —
N7320, 磺基-Cyanine5.5 NHS酯 (sulfo-Cyanine5.5 NHS ester), 1 rxn — — 10 — — — —
N5320, 磺基-Cyanine7 NHS 酯 (sulfo-Cyanine7 NHS ester), 1 rxn — — — 10 — — —
N6320, 磺基-Cyanine7.5 NHS酯 (sulfo-Cyanine7.5 NHS ester), 1 rxn — — — — 10 — —
N1820, AF 488 NHS 酯 (AF 488 NHS ester), 1 rxn — — — — — 10 —
N2825, AF 594 NHS酯 (AF 594 NHS ester), 1 rxn — — — — — — 10
A1115, Desalting spin column, PBS, 1 pcs 10 10 10 10 10 10 10
脫鹽容器瓶, 1.5mL 10 10 10 10 10 10 10
脫鹽廢液瓶，2 mL 10 10 10 10 10 10 10
PBS 錠，適用於 100 mL 緩衝液 1 1 1 1 1 1 1
15050, DMSO (dimethyl sulfoxide), labeling grade, 1 mL 1 1 1 1 1 1 1
1584-05mL, Sodium azide solution, 3%, 0.5 mL 1 1 1 1 1 1 1
1689-15mL, Sodium bicarbonate, 126 mg 1 1 1 1 1 1 1

保存期限 12 個月。

方法

1. 抗體製備

標記反應的最佳條件如下：抗體以1 mg/mL的濃度溶解在0.1 M碳酸氫鈉溶液中。疊氮化鈉與標記試劑兼容。如果抗體濃度低於1 mg/mL，則需濃縮。抗體製備應不含氨基酸、BSA 等蛋白質以及會使 pH 值處於（2-7.5 或 9-12）不利範圍的緩衝液成分。

2. 設置反應

2.1. 將含抗體的碳酸氫鈉溶液（100 ug/100 uL*）添加到熒光團中，渦旋，並在室溫下孵育 30 分鐘。

如果要標記的抗體量較少，則將凍干染料溶解在10 uL無水DMSO中，每10 ug抗體取1 uL溶液。染料溶於DMSO後，應儘快使用。

3. 標記抗體的純化

3.1.準備離心過濾柱。使用前，柱子應於室溫平衡。使用渦旋重新懸浮凝膠。將柱子放入適配的無蓋管中，以 1,000 g 離心 2 分鐘（必須仔細控制轉速對於標準 6 cm 轉子，1,000 g = 3,800 rpm）。柱子的凸出部分應朝外。

3.2. 用 400 uL的 1x PBS 緩衝液潤洗，以 1,000 g 離心 2 分鐘。

3.3.取出柱子。將其放入帶蓋的收集管中。將 100 uL 反應混合物上柱，孵育 1 分鐘， 1,000 g 離心 2 分鐘洗脫抗體。添加 1/100體積的 100x 疊氮化鈉。抗體可以分裝以延長其保質期。現用抗體可以儲存在+4 °С，其餘的可以儲存在-20 °С。

4. 染料與抗體比值的測定

計算染料抗體比，測量偶聯物的吸收光譜，即在280 nm (AAB) 或染料最大吸收峰 (ADye) 處的吸收值。染料標記抗體的典型吸收光譜如下圖所示。根據染料的不同，最大吸收波長可能會有所不同。

標記抗體的吸收光譜包含染料峰（具有較長的波長）和抗體峰（280 nm 左右）。染料與抗體比使用以下公式計算：

其中 Dye/AB — 每個抗體分子的平均熒光團數，ADye — 樣品在染料最大吸收處的光密度，AAB — 280 nm 處的樣品光密度，εAB — 280 nm 處抗體的摩爾消光係數（IgG 為 210,000）， εDye — 染料在最大吸收時的摩爾消光係數（見下表），CF280 — 染料的校正因子（見下表）。

計算示例

用sulfo-Cyanine5標記IgG抗體並純化後，得到吸收光譜如上圖。確定染料與蛋白質的比例。

由吸收光譜可得，染料最大吸收值（646 nm，見表）時的ADye = 0.184， IgG的 AAB = 0.066（280 nm），εAB = 210,000； ε染料 = 271,000，CF280 = 0.04。

染料/AB — 每個抗體有 2.43 個熒光團分子。

結果的判讀和抗體儲存

在大多數情況下，最佳染料與抗體比是每個抗體 2-3 個染料分子。由於熒光濃度猝滅，染料負載量增加到該值以上並不會改善熒光信號。當反應過程中附着的熒光團太少時，降低每次反應的抗體上樣量。使用過期的試劑盒也會導致這種結果。

我們建議檢測標記抗體與其抗原的結合。標記的抗體可保存在-20°С。當前使用的試樣應儲存在 +4 °С 下，以避免凍融循環。偶聯物的穩定性由抗體本身決定，而不是由熒光團或化學鍵決定。標記的抗體不應長時間暴露在陽光直射下，但可耐受環境光照。

相關套件

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即用型試劑盒，使用 AF 594 染料通過NHS酯化學作用標記抗體和蛋白質。該試劑盒包含所有必需的化學品和消耗品。
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貨號 數量 價格 交貨時間
6821-1rxn
1 rxn
$69 1 天
6821-10rxn
10 rxn
$450 1 天
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